RoGFP
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roGFP (englisch Redox-sensitive GFP) ist eine veränderte Variante des grün fluoreszierenden Proteins, bei der sich die Fluoreszenz redox-abhängig ändert.[1][2]
Eigenschaften
roGFP besitzt im Vergleich zur Wildtyp-Form des GFP zwei Cysteine in der β-Barrel-Struktur des GFP an den Positionen 147 und 204 auf zwei benachbarten β-Strängen in der zytosolischen Variante des roGFP1 (Mutationen C48S, S147C).[3] Durch Oxidation der Thiolgruppen der Cysteine wird Cystin gebildet, was sich in einer Blauverschiebung der Fluoreszenz des roGFP auswirkt.[4]
Anwendungen
Das roGFP wird unter anderem als redox-abhängiger Biosensor und als Reporterprotein verwendet. Mit roGFP kann das Redox-Potential und die Menge an Glutathion im Zytosol in vivo bestimmt werden,[5] indirekt auch Wasserstoffperoxid.[6] Als Fusionsprotein des roGFP mit Glutaredoxin 1 kann die Fluoreszenz erhöht werden.[7]
Im endoplasmatischen Retikulum kann mit roGFP2 (Mutationen C48S, S147C, S65T) die Bildung von ROS verfolgt werden.[8][9]
Alternative optische Nachweisverfahren verwenden z. B. Resazurin (synonym AlamarBlue), Dichlorofluorescein (DCF) oder die Proteine HyPer oder rxYFP.[10]