Touchdown-PCR
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Die Touchdown-PCR ist eine Variante der Polymerasekettenreaktion, bei der in jedem Zyklus der Amplifikation die Hybridisierungstemperatur leicht abgesenkt wird, um in Mischungen spezifischere Bindungen zwischen Vorlage und Primern zu erzielen.[1]
Eigenschaften
Bei der Touchdown-PCR wird im ersten Zyklus die maximale Hybridisierungstemperatur verwendet.[2] In den weiteren Zyklen wird die Temperatur schrittweise abgesenkt, bis sie bei der errechneten Hybridisierungstemperatur, oder etwas darunter liegt. Sie wird eingesetzt, wenn mehrere Primer oder mehrere Bindungsstellen für Primer und dementsprechend mehrere Hybridisierungstemperaturen vorkommen, wie z. B. degenerierte Primermischungen.[3][4] Touchdown erhöht die Spezifität der Reaktion bei höheren Temperaturen und steigert die Effizienz gegen Ende durch Senkung der Hybridisierungstemperatur.