T5-Exonuklease
Enzym aus der Gruppe der Nukleasen
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Die T5-Exonuklease (englisch T5 flap endonuclease) ist ein Enzym aus der Gruppe der Nukleasen (Exonukleasen) und wird vom Bakteriophagen T5 gebildet.
| T5-Exonuklease | ||
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| C-terminale Domäne, nach PDB 1UT5 | ||
| Andere Namen |
5'-3' exonuclease, T5 flap endonuclease, Escherichia phage T5 Exonuclease, T5 D15 gene product | |
| Masse/Länge Primärstruktur | 291 Aminosäuren, 33.448 Da | |
| Bezeichner | ||
| Externe IDs | ||
| Enzymklassifikation | ||
| EC, Kategorie | 3.1.11.- | |
| Orthologe (Escherichia Phage T5) | ||
| Entrez | 2777611 | |
| UniProt | P06229
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| PubMed-Suche | 2777611
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Eigenschaften
Die T5-Exonuklease dient während der Infektion von Escherichia coli dem Bakteriophagen bei der DNA-Replikation des viralen Genoms. Sie katalysiert als Exonuklease die Hydrolyse der endständigen Nukleotide von DNA-Doppelsträngen mit blunt ends in 5'→3'-Richtung unter Freisetzung von Nukleosid-5'-Phosphat. Bei 5'-gabelnder DNA schneidet die T5-Exonuklease als Endonuklease an der Verbindung zwischen einzelsträngiger und doppelsträngiger DNA. Die einzelsträngige DNA muss dafür ein freies 5'-Ende aufweisen. Die T5-Exonuklease bindet DNA mit Pseudo-Y-Struktur mit einer Dissoziationskonstante von 5 nM−1.[1] Cofaktoren sind drei zweiwertige Magnesiumionen, wovon zwei für die Nukleaseaktivität notwendig sind.[2] Die Reaktion erfolgt auch mit anderen zweiwertigen Kationen außer Calciumionen.[3] Das pH-Optimum der Exonuklease liegt bei 9,3 und bei 5,5 für die Endonuklease.
Anwendungen
Die T5-Exonuklease wird in der Biochemie unter anderem zum Gibson Assembly eingesetzt.[4][5]