La Agar Bilis Esculina se usa preferentemente para diferenciar entre Enterococcus y Streptococcus. Los miembros del género Enterococcus son capaces de crecer en presencia de un 40% de bilis (oxgall) e hidrolizar la esculina para formar glucosa y esculetina. La esculetina se combina con iones de hierro formando finalmente un complejo de color negro.
En algunos casos, ciertas bacterias son capaces de hidrolizar la esculina. Una placa que contenga esculina aparecerá fluorescente bajo luz ultravioleta. Algunas bacterias pueden hidrolizarlo, produciendo colonias oscuras bajo luz ultravioleta, al contrario que las claras.
Cuando se descubren nuevas técnicas en la identificación de enterococos, normalmente se comparan con el uso de la bilis esculina.[3]