Inmunocitoquímica
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Inmunohistoquímica es una forma de inmunotinción que permite identificar selectivamente antígenos en células y tejidos, mediante anticuerpos que se unen específicamente a dichos antígenos. Albert Hewett Coons, Ernest Berliner, Norman Jones y Hugh J Creech desarrollaron la inmunofluorescencia por primera vez en 1941, lo que condujo posteriormente al desarrollo de la inmunohistoquímica.[2][3]
La inmunohistoquímica se usa ampliamente para diagnosticar células anormales, como las de tumores cáncerosos, y también en investigación básica para estudiar la distribución y localización de biomarcadores y proteínas expresadas diferencialmente en distintos tejidos.[4]
Preparación y fijación del tejido
La inmunohistoquímica puede realizarse sobre tejido fijado y embebido en parafina, así como en tejido congelado. El proceso general incluye: fijación adecuada, recuperación de antígenos, incubación con anticuerpo primario y luego con anticuerpo secundario.
La fijación preserva la morfología celular. La fórmula de fijación, la proporción de fijador a tejido y el tiempo de fijación afectan el resultado. El fijador suele ser formalina al 10% en tampón neutro. Tiempo típico: 24 horas a temperatura ambiente, con proporción fijador:tejido de 1:1 a 1:20. Luego se puede embedir en parafina.
En secciones congeladas, la fijación suele hacerse después del corte, usando acetona o formalina.
Corte de secciones
Se utiliza un micrótomo. Para tejidos embebidos en parafina, grosor típico: 4 μm; para congelados: 4–6 μm. El grosor influye en la visualización de estructuras y proteínas. Los tejidos de parafina deben desparafinarse en xileno o sustituto, seguido de alcohol.[5]
Recuperación de antígenos
Se realiza para exponer los epítopos que pueden estar bloqueados por la fijación, normalmente usando calor en solución tampón (microondas, autoclave, placas calefactoras o baños de agua). No siempre es necesaria en secciones congeladas, pero puede mejorar la señal si se fijaron en acetona o formalina.[6]
Bloqueo
Para reducir tinción de fondo se incuba con suero normal del mismo animal del anticuerpo secundario o con buffers comerciales. Otros bloqueadores incluyen leche desnatada, BSA o gelatina. Actividad enzimática endógena también puede ser bloqueada con peróxido de hidrógeno.
