Subclonaje
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En biología molecular, se denomina subclonaje a la técnica utilizada para mover un gen u otra secuencia de interés desde un vector origen a un vector de destino.
Es importante destacar que aunque similares, la técnica del clonaje y del subclonaje no son lo mismo, pues la segunda ya parte de un gen clonado.
Utilizamos enzimas de restricción para extraer el gen de interés del primer vector. Después es purificado de entre todos los restos y fragmentos. Una vez purificados, amplificamos las secuencias mediante PCR.
Simultáneamente utilizamos las mismas enzimas de restricción para cortar el vector de destino. Tenemos que utilizar las mismas enzimas de restricción para generar extremos cohesivos complementarios que faciliten la posterior ligación. Posteriormente purificamos el vector previamente cortado.
Mezclamos el ADN a insertar y el vector tratado con ligasa en una proporción 3:1.[1]
