精子選別
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精子選別(せいしせんべつ、英: sperm sorting)は、卵細胞に受精させる精子の種類を選別することである。遠心分離法やスイムアップ法などいくつかの技術が存在する。フローサイトメトリーなど新たな応用技術の登場によって精子選別の可能性は広がり、新たな技術の開発は現在も続いている。
精子選別は、最も健康な精子を選別する目的のほか、性選別など、より具体的な形質の決定のためにも利用される。精子は、DNA含量の差異によってX染色体を持つ集団とY染色体を持つ集団に分離することができる。その結果生じた「性選別された」精子はその後、人工授精や体外受精など他の生殖技術と組み合わせることで、目的の性別の子孫を作り出すことができる。こうした性選別は畜産業のほか医療においても利用されている。
従来型技術
フローサイトメトリーの出現以前から、精子選別にはいくつかの方法が利用されていた。連続的または非連続的勾配による密度勾配遠心は、精子濃度の低い精液試料を濃縮することができ、品質の指標として精子の密度を利用することができる[1][2]。同様に、スイムアップ法と呼ばれる技術は、遠心分離後のステップの後に溶媒中を泳がせることで、運動性の高い精子集団を選別する。ただし、遠心分離は精子に有害であり、活性酸素種を発生させる[1]。従来型の技術は生殖補助医療において日常的に利用されている[3]。
フローサイトメトリー
フローサイトメトリーは精子選別に利用される新たな技術であり、この技術の応用により精子選別に新たな機会が切り開かれた。しかし、フローサイトメトリーに基づく精子選別は多くの場合、DNAを染色する蛍光色素を利用するため、ヒトの生殖医療におけるこの技術の安全性に関しては科学的な議論がある[4][5]。
しかしながら、フローサイトメトリーは現在のところ唯一、個々の精子のDNA含量を測定することで将来の子孫の性別を決定することができる技術である。大きなX染色体を含むか小さなY染色体を含むかを評価し、X精子とY精子を分離することが可能である[6]。アメリカ合衆国農務省とローレンス・リバモア国立研究所によって開発されたBeltsfield Sperm Sexing Technologyでは、X染色体とY染色体のDNAの差に基づいて選別が行われる[7]。フローサイトメトリーによる選別に先立って、各精子のDNAに結合するHoechst 33342と呼ばれる蛍光色素で精液は標識される。X染色体はY染色体よりも大きく、より多くのDNAを含んでいるため、X染色体を持つ精子はY染色体を持つ精子よりも多くの量の色素を吸着する。その結果、フローサイトメトリーで紫外線照射された際、X精子はY精子よりも強い蛍光を発する。精子はフローサイトメーターを一列に並んで通過し、各精子はそれぞれ1滴の液滴に包まれ、染色体に対応した電荷が(X精子を含む液滴ならば正電荷、Y染色体を含む液滴ならば負電荷というように)付加される。X液滴とY液滴は静電偏向によって分離され、別々の試験管へと集められてその後の過程に利用される[8]。
精子選別に利用される、サイトメトリーを利用した他の技術としてはMACS(Magnetic-activated cell sorting)があり、DNAが断片化された精子を除去するために生殖補助医療で日常的に利用されている。この技術は、アネキシンVなどのプログラム細胞死(アポトーシス)の細胞表面マーカーに対する抗体に磁気ビーズを付加したものを用いて行われる。これらの抗体を結合させた後、精子懸濁液に磁場を印加することでアポトーシスが起こっている精子は選択的に除去される[9]。MACSはDNAに結合する蛍光分子を用いる必要性がない。
他の技術
精子のDNA損傷はラマン分光法によって検出できる場合がある[10]。しかし、個々の形質を検出するほどの特異性はない[10]。DNA損傷の最も少ない精子はその後、顕微授精によって卵細胞へ注入される[10]。精子選別の手法として提案されていたり、試験が行われたりしている手法は他にも多く存在する[1][3]。DNA損傷指標の低い精子を選択するため、電気泳動法[11]、Z法[12]、MACSなどの技術を用いて非断片化DNAを持つ精子集団を濃縮することができ、密度勾配遠心などの精子調製プロトコルと組み合わせることで、より優れた品質の精子を得ることができる[13]。
精子の細胞膜のヒアルロン酸結合部位は、精子の成熟度の指標となる[14][15]。PICSI(physiological intracytoplasmic sperm injection)とスパームスロー(Sperm Slow)と呼ばれる2つの手法でこのことが利用されている。どちらの手法も、精子の洗浄または遠心分離による精子の調製が必要である。